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讲解ELISA试剂盒如何避免假阳性现象
  • 发布日期:2018-11-14      浏览次数:156
    •    ELISA试剂盒出现假阳性的现象一般是与错误的操作有关,那么该如何避免假阳性现象呢?厂家臻科有妙招:
        1、加样
        对于间接ELISA试剂盒标本一般都要进行稀释,如果加样不准就会造成误差,尤其当稀释倍数大时,很小的误差,会导致较大的相对误差,使阴性(或弱阳性)标本呈阳性(或阴性)。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。目前,大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本,可较好地避免以上误差。
        2、洗涤
        在ELISA试剂盒中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步,应引起操作者重视。无论是手工操作还是机器操作,得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关,ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。
        3、 温育
        每种试剂都有其最合适的反应模式,其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高,反应时间长,会造成整板本底高,阳性率高。温育一般用湿盒或水浴,反应板不宜叠放,以保证各板温度都能迅速平衡,为避免蒸发,板上应加盖。
        4、酶标仪判读
        作为记录测定结果的仪器,酶标仪的性能稳定与否,决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养,对滤光片要定期校正;其次酶标仪波长设置要正确,一般使用双波长,一个检测波长,一个参比波长,以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外,在用酶标仪读数时一般先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同,使用中应详细阅读说明书
        由于酶联免疫吸附技术目前在技术上缺乏标准化,尽管目前国际上以及我国有了部分标准血清或参比血清(血清盘)。但由于受方法学及技术条件的限制,在酶联吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性,但我们可以通过以上措施把非特异性显色降至最低限底,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。
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